3.Spracujte a vyšetrite moč kvantitatívne a kultivačne.

Odber materiálu
Na kultivačné vyšetrenie sa moč musí odoberať tak, aby sa vylúčila kontaminácia odobratého moču. Odoberá sa stredný prúd moču do sterilnej skúmavky, alebo cievkovaný moč len u novozavedenej cievky. U malých detí robíme odber pomocou plastikového sáčku, ktorý sa otvorom nalepí na ústie močovej rúry. Odber suprapubickou punkciou, je napichnutie močového mechúra punkčnou ihlou cez brušnú stenu (najmä u malých detí). Moč sa má spracovať do 2 hod. po odbere.

Spracovanie materiálu
Moč sa vyšetruje kvantitatívne, stanoví sa počet baktérií v ml moču. Moč riedime v pomere 1:100 a to tak, že 50 ul + 5 ml fyziologického roztoku. Z takto riedeného moču očkujeme 50 l na CLED agar a 50 ul na MC. Necháme asi 15 min vsiaknuť a rozočkujeme po povrchu platne… medzi jednotlivými túrami kľučku nevypaľujeme.
CLED agar – univerzálna pôda - G- paličky, G+ koky. Potláča plazivý rast Protea mirabilis (KA to nespraví). McConkey agar – G- paličky, Kultivujeme 24 hod. a hodnotíme kvantitu:
1.0 – pôdy ostali sterilné
2.1-4 kolónie - viac ako 104 baktérií / 1 ml moču – bezvýznamná bakteriúria
3.5-50 kolónií – 104 – 105 baktérií / 1 ml moču – suspektná (pravdepodobná) bakteriúria
4.nad 50 kolónií - viac ako 105 baktérií / 1 ml moču – významná bakteriúria
5.2 a viac bakteriálnych druhov – kontaminovaný moč

Kvalitatívne a kvantitatívne vyhodnotenie citlivosti na ATB – princíp diskovej metódy /vysvetliť, vyhodnotiť, naočkovať kmeň a pridať disky/.

4.Spracujte a vyšetrite hnis na prítomnosť aeróbnych a anaeróbnych baktérií pri hnisavých ochoreniach.

Odber materiálu
Najčastejšie sa odoberá ster z chorobných plôch pomocou vatového tampónu. Odoberá sa vždy z rozhrania medzi zdravým a poškodeným tkanivom. Tekutý materiál sa odoberá pomocou punkčnej ihly do sterilnej skúmavky. Pri odbere na anaeróbne vyšetrenie sa tekutý materiál odoberie do injekčnej striekačky, z ktorej vytlačíme prebytočný vzduch a ihlu zapichneme do gumovej zátky. Kúsky tkaniva je možné posielať v skúmavkách naplnených CO2. Možné sú aj transportné pôdy.

Spracovanie na pôdy – anaeróbne
Materiál sa očkuje na KA, MC, SA. Pomnožovacia pôda je pečeňový bujón, ktorý po 24 hod. vyočkujeme na KA. Pri steroch z hlavy pridávame aj ČA (hemofily).

Spracovanie materiálu na aeróbnu kultiváciu
Anaeróbne baktérie sú charakteristické tým, že vo svojom životnom prostredí neznášajú kyslík. Podľa schopnosti rastu v prítomnosti O2, rozlišujeme základné skupiny: - aerotolerantné (5% O2) – Clostridium perfringens
-stredne prísne anaeróby (1-2% O2), patrí sem väčšina lekársky dôležitých druhov – Cl. sporogenes, Bacteroides fragilis
-prísne anaeróby (menej ako 1% O2) – Cl. haemolyticum

Očkuje sa na VL agar (Veillonov) a na VL agar s ATB /vysoko naliate pôdy, obsahujú redukujúce látky, znižujúce oxidačno-redukčný potenciál pôdy, je to hodnota elektrického napätia prostredia/. Anaeróby rastú pri záporných hodnotách redox potenciálu, keď v prostredí prevládajú redukované látky. Anaeróby sa nevedia chrániť pred účinkami napr. pred toxicitou peroxidu vodíka. Peroxid vodíka vzniká pri reakcii kyslíka s vodíkovými iónmi. Anaeróbne baktérie nemajú enzým peroxidáza (alebo len málo účinný). Pomnožovacou pôdou je VL bujón, ktorý sa po 48 hod. vyočkuje na VL agar. VL bujón sa pred použitím musí regenerovať varom,
vo vodnom kúpeli, aby sa odstránil prebytočný O2. U materiálov s podozrením na klostrídiovú infekciu očkujeme aj VL agar s parafínom. Naočkovaný materiál zalejeme parafínom /10 min, 80°C/, bežné baktérie zahynú, klostrídie vytvárajú spóry. Kultivujeme 24 hod., ak tam boli klostrídie je parafín vytlačený nahor. Urobíme preparát – veľké, hrubé G+ paličky.

Anaeróbne materiály musíme kultivovať v anaeróbnom prostredí – ANAEROSTAT. Nádoba obsahuje držiak na skúmavky, vyvýjač CO2 a H, katalyzátor, indikátor prostredia. Celá nádoba sa vloží do termostatu a kultivuje sa 48 hod.
a.priamy mikroskopický preparát zafarbený podľa Gramma, orientačné farbenie najmä na klostrídie /hrubé G+ paličky/
b.tuhé pôdy – VL agar s krvou, VL agar s ATB (VAN, KAN, STR) na potlačenie rastu nežiadúcich baktérií
c. tekuté pôdy – VL bujón, kultivovať v anaeróbnom prostredí, alebo zaliaty vrstvou sterilného parafínu, pred použitím prevariť (regenerovať, odstrániť vzduch z pôdy)
d.hemokultivačné nádoby – sú špeciálne na kultiváciu anaeróbov, odber krvi priamo do nádobiek

1. odstránenie kyslíka z prostredia chemickou cestou, reakcia pyrogalolu so sódou. Potreby: čistý pyrogalol, hydrouhličitan sodný, filtračný papier, lepiaca páska, Petriho misky s VL agarom. Postup: na filtračnom papieri zmiešať 4:1, zložiť papier, prilepiť, navlhčiť, misku zalepiť leukoplastom alebo zaliať voskom.
2. Anaerostat OXOID – Katalyzátor (kovová sieťka s peletami s vrstvičkou paládia, treba po použití znova regenerovať). Zmes, ktorá po pridaní vody uvoľňuje H2 a CO2, pomocou katalyzátora sa prítomný kyslík zlučuje s vodíkom na H2O pri pomerne nízkej teplote /cca 150°C/. Indikátor anaeróbneho prostredia.
3.Biologický spôsob odstránenia kyslíka z prostredia pomocou kmeňa Serratia marcescens.
4.Fyziologický spôsob – odsatie vzduchu a jeho nahradenie dusíkom, CO2, alebo ich zmesou.