Streptococcus pneumoniae
Rastie na KA ako viridujúci streptokok, tvorí dvojaké kolónie, preliačnený stred pri pohľade zboku. Opúzdrené kmene rastú ako veľké, mukózne, roztekajúce sa kolónie.

Mikroskopicky
Podľa Gramma sú to G+ koky, usporiadané vo dvojiciach typického tvaru. Na dôkaz púzdra používame farbenie podľa Burriho. Na podložnom sklíčku v kvapke čierneho tušu rozmiešame bakteriálnu kultúru, hranou druhého sklíčka spravíme tenký náter, necháme ho vyschnúť. Farbíme karbolfuksínom v kyvete asi 1 min a oplachujeme vodou, tiež v kyvete, usušíme a mikroskopujeme pri 1000x zväčšení. Telá baktérií sú zafarbené na ružovo, púzdro zostane nezafarbené, priesvitné. Zóna okolo baktérií a pozadie je čierne. /tzv. negatívne farbenie/ Pri diagnostike pneumokokov využívame aj citlivosť na optochín. 

Optochínový test – test robíme na KA, na celú plochu pôdy naočkujeme kmeň a pridáme optochínový disk. Po 18 hod. kultivácie hodnotíme veľkosť zábrany rastu. Pozitívny dôkaz pneumokoka sa prejaví zónou zábrany rastu aspoň 16 mm.

9. Spracujte a vyšetrite výtery z pohlavných ciest pri podozrení na kvapavku. Popíšte odber a transport materiálu. Spracujte materiál kultivačne, popíšte morfologické, rastové a biochemické vlastnosti Neisseria gonnorhoeae.

Odber mateiálu
Materiál na kvapavku sa odoberá u žien najčastejšie z hrdla maternice, u mužov z močovej trubice. Tampón sa musí transportovať v polotuhej Stuartovej pôde.

Spracovanie materiálu
Tampóny sa očkujú na obohatený KA a na obohatený KA s ATB. Kultivácia 48 hod./ 37°C,  vlhkosť,  CO2.

Neisseria gonorrhoeae Sú drobné G- negatívne diplokoky, v mikroskopickom obraze pripomínajú kávové zrná. Sú často uložené v leukocytoch, fagocytované. Nesporulujú, nie sú pohyblivé, netvoria púzdra. Sú náročné na kultiváciu (KA s prísadou séra, alebo ascitu), vyžadujú pri kultivácii dostatok vlhkosti, zvýšený obsah CO2, kultivujú sa spravidla 48 hod. Je pôvodcom ľudského ochorenia – kvapavky (gonorea)

Diagnostika
1. mikroskopický preparát – G- diplokoky (môžeme ich diagnostikovať priamo z hnisu, alebo sekrétu), uložené sú spravidla intracelulárne.
2. kultivačná – kultivujeme ich na obohatenom KA, tzv. GO pôda a na KA obohatenom + ATB na potlačenie sprievodnej flóry, vyššom obsahu CO2
(asi 10%) a 48 hod. Kolónie na tuhých pôdach rastú ako drobné priesvitné, okrúhle kolónie, prirovnávajú sa ku kvapke rosy.
3.pozitívna oxidázová a katalázová reakcia
4.biochemické vlastnosti určujeme pomocou Neisseriatestu, 8 vlastností
5. Phadebact Monoclonal GC test - Latexová aglutinácia, serologická typizácia kmeňov N.gonorrhoeae. Vykonanie: do 0,5 ml fyz. roztoku suspendujeme kolónie testovaného kmeňa, 5 min. povaríme. Kvapku suspenzie zmiešame s kvapku séra - dva antigény: W I, W II / III. V prípade pozitivity dochádza k aglutinácii.
10. Laboratórne metódy, ktoré informujú o stave imunitného systému.

Postup pri odbere krvi a príprave séra na serologické reakcie.
Aglutinačné reakcie – Widalova reakcia.

Odber materiálu
Odoberá sa venózna krv, najčastejšie z lakťovej jamky bez antikoagulancií. Krv necháme postáť, oddelíme krvný koláč a scentrifugujeme. Sérum odsajeme do ďalšej sterilnej skúmavky. Sérum nesmie byť chylózne, hemolytické alebo kontaminované. V sére dokazujeme najčastejšie protilátky, v niektorých stanoveniach aj antigény.
Antigény môžu byť korpuskulárne, patria sem baktérie, vírusy, kvasinky a nosiče antigénu. Ako nosič antigénov sa používajú latex, erytrocyty alebo bentonit. Nekorpuskulárne antigény sú enzýmy alebo toxíny baktérií. Prostredia sú fyziologický roztok, tlmivé roztoky rôzneho zloženia, príp. tlmivé roztoky s bielkovinou (albumín) 

Widalova reakcia
Používa sa na dôkaz P proti sal. typhi, pri ochorení na brušný týfus. P sa objavujú v sére chorého na 5-6 deň od začiatku ochorenia. Odoberáme aj párovú vzorku v odstupe aspoň 2 týždne. Min. 4x vzostup titra potvrdzuje akútne ochorenie.

č. skúm.12345
sérum 1:10Agsérum
1:20Agsérum
1:40Agsérum
1:80Agfyziol.
roztokAg
O-9,120,5ml0,50,50,50,50,50,50,50,50,5
O-4,5,120,50,50,50,50,50,50,50,50,50,5
H-d0,50,50,50,50,50,50,50,50,50,5
H-b0,50,50,50,50,50,50,50,50,50,5
H-1,20,50,50,50,50,50,50,50,50,50,5
H-i0,50,50,50,50,50,50,50,50,50,5
H-g m0,50,50,50,50,50,50,50,50,50,5
výsledný
titer1:201:401:801:160
0,7 ml séra + 6,3 ml fyziologického roztoku (riedenie 1:10), prvá skúmavka 1

Do zbytku skúmavky č.1 3,5 ml riedenia 1:10 + 3,5 ml fyziologického roztoku, riedenie 1:20 druhá skúmavka 2
Do zbytku skúmavky č.2 3,5 ml riedenia 1:20 + 3,5 ml fyziologického roztoku, riedenie 1:40 tretia skúmavka 3
Do zbytku skúmavky č.3 3,5 ml riedenia 1:40 + 3,5 ml fyziologického roztoku, vznikne riedenie 1:80 – štvrtá skúmavka 4

Skúmavky s O Ag inkubujeme pri 50°C/18 hod.
Skúmavky s H Ag inkubujeme 2 hod./50°C a potom 18 hod./ 20°C

Hodnotenie reakcie:
1.Negatívna kontrola musí byť negatívna.
2.Aglutinácia O antigénov je zrnitý neroztrepateľný aglutinát. Hodnotíme najvyšší titer v ktorom ešte je aglutinácia.
3.Aglutinácia s H antigénov je chumáčikovitý roztrepateľný aglutinát.