1.Vyšetrenie mozgovomiechového moku pri podozrení na bakteriálnu meningitídu.

Odber materiálu
Mozgovomiechový mok sa odoberá prísne asepticky lumbálnou alebo subokcipitálnou punkciou. Odber by mal robiť lekár punkčnou ihlou, ktorá sa zavedie do mozgovomiechového kanála. Likvor sa nechá odkvapkať do sterilnej skúmavky (prázdna, s citrátom sodným, s 10% roztokom glukózy) a ihneď sa má doručiť do laboratória (do 2 hod., ideálne je do 1 hod.) Odoberá sa cca 5 ml.

Spracovanie materiálu
V laboratóriu sa likvor scentrifuguje, supernatant sa opatrne odsaje asi na 1,5 ml. Takýto materiál sa spracováva mikroskopicky. Urobia sa dva nátery, zafarbia sa podľa Gramma a podľa Lofllera. Nátery pred farbením fixujeme metanolom (preliatím do odparenia). Ďalšia časť materiálu sa spracuje serologicky – latexovou aglutináciou na dôkaz najbežnejších patogénov pri bakteriálnych meningitídach.

Latexová aglutinácia
5 protilátok – proti N. meningitidis, Str. pneumoniae, H. influenzae, E. coli, Str. agalactiae. Zmiešame kvapku likvoru s príslušnou latexovou suspenziou. Ak je v likvore prítomný niektorý z patogénov vzniká aglutinácia.

Kultivačné spracovanie
Likvor je u zdravého človeka sterilný, za patologické sa považujú všetky mikroorganizmy prítomné v likvore. Preto je potrebné likvor spracovávať na veľkú škálu kultivačných pôd. KA, MC, ČA, SA, GO (obohatený KA so suplementom). Pomnožovacou pôdou je pečeňový bujón, ktorý sa po 24 hod. vyočkuje na KA a GO.
KA – všetko okrem hemofilov
MC – G- paličky /skvasujúce laktózu, pozit. ružové až červené, negat. vo farbe pôdy/
ČA – hemofily
GO – neisserie
SA – kvasinky a plesne

Diagnostika N. meningitis
Často ako nosičský kmeň, z tampónu z hrdla a nosa. Je pôvodcom epidemického zápalu mozgových blán (meningitída). Podieľajú sa aj na akútnych respiračných ochoreniach (pneumónie, rinofaryngitídy, septikémie).

Mikroskopicky
G- diplokoky /vytvárajú sploštené dvojice/ uložené intracelulárne aj extracelulárne, mikroskopujeme už likvor

Kultivačne
Rastú na obohatenom KA tzv. GO, pri vyššej vlhkosti, vyššom obsahu CO2 (asi 10%), 48 hod. – stredne veľké sivasté kolónie bez hemolýzy. 

Biochemické vlastnosti
Majú pozitívnu oxidázovú a katalázovú reakciu.

Oxidázová reakcia – dôkaz produkcie enzýmu cytochrómoxidáza, môže sa urobiť na filtračnom papieriku napustenom činidlom. Filtračný papier sa navlhčí fyziologickým roztokom a bakteriovou kľučkou sa naň natrie baktéria. Pri pozitivite tmavomodrá farba v mieste, alebo nakvapkanie oxidázového činidla priamo na kolónie, v prípade pozitivity kolónie sčernajú.
Katalázová reakcia – rozklad peroxidu vodíka enzýmom kataláza. Do kvapky 3% H2O2 pridáme testovaný kmeň. Pozitivita sa prejaví vznikom bubliniek (rozklad H2O2 na H2O a O2)

Neisseria test
Komerčne pripravená platnička s jamkami a testami /obdoba Enterotestu/. 8 reakcií, 12 kmeňov. Na odlíšenie jednotlivých N., treba čistý kmeň, kultivujeme 24 hod. Zmena farby v jamkách…

Haemophilus influenzae
Neopúzdrené kmene – bežná súčasť flóry dýchacích ciest, môžu sa však uplatniť pri akútnych a chronických bronchitídach.
Opúzdrené kmene – hlavne typ B, vyvolávajú meningitídy, sinusitídy, zápaly priedušnice, spojiviek, stredného ucha, pneumónie (hlavne ako komplikácie vírusových ochorení).

Respiračnou cestou.
Na vyšetrenie sa posielajú výtery z nosohltana, hnis, krv, likvor, punktáty kĺbov, bronchiálny výplach.

Mikroskopicky
Jemné drobné G- paličky , sú veľmi náročné na kultivačné podmienky, pre svoj rast potrebujú v pôde prítomné rastové faktory. Je to rastový
faktor X – hemín a V – nikotínadeníndinukleotid.
Likvor: koncentrácia centrifugovaním, farbenie sedimentu podľa Gramma, vyšetrenie likvoru priamo pomocou latexovej aglutinácie.

Kultivačne
Nerastú na bežnom KA, pre ich záchyt je potrebné použiť ČA. Na ČA rastú ako drobné priesvitné kolónie, veľkosti cca 1mm.

AMEN test – KA naočkujeme po celom povrchu, spravíme čiaru S. aureus. Kultivujeme 24 hod., ak je testovaný kmeň hemofil, je v zóne okolo stafylokoka hemolýza a len tam sú vyrastené kolónie hemofila. SA mu poskytol rastové faktory. /fenomén satelitizmu/. Test závislosti na rastových faktoroch – Na MH agar bez krvi naočkujeme testovaný kmeň, pridáme papierové disky napustené rastovými faktormi /X, XV, V/. Keďže HI potrebuje pre svoj rast aj X aj V faktor, tak ak je testovaný kmeň HI vyrastú kolónie len pri disku XV. H.parainfluenzae potrebuje pre svoj rast faktor V.