Laboratórna úloha: Stanovenie bielkovín
Téma: stanovenie bielkovín
Úloha 1.: Stanovte albumíny, globulíny a oddeľte skleroproteíny.
Úloha 2.: Biuretova reakcia
Pomôcky: Destilovaná voda, kadičky, filtračný papier, pH papieriky, pinzeta, ryhovaný lievik, laboratórne váhy, závažia, lyžičky, stojan na filtráciu, vajce, varič, pipeta,
Chemikálie: 10% roztok NaCl, síran mednatý
Teoretický úvod:
Bielkoviny podľa rozpustnosti v rozličných rozpúšťadlách:
1.rozpustné
a.albumíny pH = 7, Rozpustné v destilovanej vode.
b.globulíny pH menej ako 7, Rozpustné v roztoku solí, kyselín a hydroxidov.
2.nerozpustné bielkoviny
a. skleroproteíny
Biuretova reakcia
Dôkazom peptidickej väzby -CO-NH- je Biuretova reakcia. Bielkoviny dávajú v alkalickom prostredí s iónmi Cu2+ (použili sme síran mednatý) farebný komplex. Intenzita zafarbenia závisí od molekulovej hmotnosti bielkoviny.
Postup:
Pripravíme všetky pomôcky na vykonanie pokusu.
Rozdelíme si bielko na dve časti. (na zistenie albumínov, globulín, skleroproteínov a na Binretovu reakciu)
Do bielka pridáme vodu (1:1) a pretrepeme.
Prefiltrujeme bielko pretrepané s vodou.
Albumíny – prejdú do roztoku (1. vzorka)
Globulýny – zostanú na filtri
Skleroproteíny – zostanú na filtri
Celý filtračný papier zalejeme aj s obsahom roztokom NaCl
Znovu prefiltrujeme.
Skleroproteíny – na filtri
Globulíny – prejdú do filtrátu
Zmeriame pH papierikom pH vo filtráte, malo by byť do 7
Vzorku zahrejeme na 75 °C, kedy sa denaturujú bielkoviny
Pripravíme si pomôcky na Biuretovu reakciu
Do skúmavky so vzorkou vaječného bielka prilejeme rovnaké množstvo 10% roztoku NaCl
Do tohto roztoku prikvapkávame síran mednatý
Fialové sfarbenie roztoku dokazuje prítomnosť peptidických väzieb
1. vzorka:
pH = 6 - 7
Biuretova reakcia:
Dokázali sme prítomnosť peptidických väzieb. Roztok po prikvapkávaní síranu mednatého sa nám sfarbil do fialova.
Záver:
V tejto laboratórnej úlohe sme si dokázali, že bielkoviny sa podľa rozpustnosti v rozličných rozpúšťadlách delia na tri časti, a to albumíny, globulíny a skleroproteíny. Zdokonalili sme sa vo filtrovaní a pracovaní s laboratórnymi pomôckami. Peptidické väzby sme dokázali Biuretovou reakciou, kedy nám roztok po prikvapkávaní síranu mednatého zmenil farbu na fialovú.
|
