Laboratórne cvičenie č. 5
Dátum:
Téma: Pozorovanie fáz mitózy
Úloha č.1:
Materiál a pomôcky:
Erlenmayerova banka naplnená vodou a cibuľkami (sadzačkami) s vyrastenými vedľajšími korienkami dlhými asi 1 cm, filtračný papier, 3 malé Petriho misky, špáradlá, kahan, gumová zátka, destilovaná voda, zásobný roztok fixačnej tekutiny (3 diely etanolu a 1 diel ľadovej kyseliny octovej), zásobná maceračná tekutina (1 diel etanolu a 1 diel HCl), farbivo (acetokarmín, acetoorceín alebo acetonigrozín, stačí genciánová fialová - niekde pod názvom violeť), kvapkadlo, potreby na mikroskopovanie.
Postup:
1. Naplníme Erlenmayerovu banku vodou tak, aby podcibulie cibuliek posadených na hrdlo banky bolo vo vode. Banku dáme na chladné miesto. Odparenú vodu dopĺňame odstátou vodou, lebo korienky (priebeh mitózy) sú citlivé na zmenu teploty.
2. Potom z rýchlených cibuliek odrežeme asi 0,5 cm dlhé časti korienkov a špáradlom ich prenesieme do roztokov v Petriho miskách. Fixujeme asi 10 minút, macerujeme tiež 10 minút a potom preplachujeme vo vode opäť 10 minút.
3. Z vypraného korienka po macerácii odrežeme nadbytočnú časť tak, aby na podložnom sklíčku zostala len asi 2 mm časť s meristémami. Na túto časť kvapneme kvapku farbiva a priložíme krycie sklíčko.
4. Potom slabým tlakom hrany gumovej zátky na krycie sklíčko korienok roztlačíme, aby sa izolované bunky rozostúpili do roviny.
5. Preparát veľmi mierne zohrejeme nad kahanom (teplota nesmie vystúpiť nad 60º C, kontrolujeme ju položením podložného sklíčka na chrbát ruky). Ak stred preparátu zostane belavý (nesfarbený), nadvihneme krycie sklíčko za prečnievajúci roh, aby farbivo mohlo vniknúť aj k bunkám v strede aparátu. Prípadne kvapneme ešte malú kvapku farbiva a znova zohrejeme.
6. Keď je preparát rovnomerne sfarbený, posunieme krycie sklíčko do správnej polohy a skontrolujeme, či nie je horná alebo dolná strana podložného a krycieho sklíčka znečistená.
Výsledok:
