Monoklonálne protilátky

Monoklonálne protilátky-tzv.hybridómová technológia umožňuje propraviť monokloálne protilátky, ktoré sú na rozdiel od polyklonálnych produkto jedného druhu leukocytov.
To so sebou prináša tieto výhody:
-monoklonálne protilátky sú homogénne-sú to identické molekul s totožnou štruktúrou , špecifitou a afinitou voči antigénu.
-Pri vhodnej propagácií klonu možno pripraviť prakticky neobmedzené množstvo takých protilátok-to umožňuje použiť rovnakú protilátku vo všetkých laboratóriách po dlhú dobu.

-Na inunizáciu nie je nutné používať celkom homogénny antigén.
Pretože sa lymfocyty používajú v bunkovej kultúre in vitro len veľmi krátku dobu –niekoľko dní- je nutné ich spojiť s nádorovými bunkami.Vzniknuté hybridómy majú potom vlastnosti oboch rodičovských buniek-schopnosť produkovať špecifické protilátky a ľahko a opakovane sa deliť.
B-lymfocyty pre fúziu sa získavajú zo sleziny imunizovaných myší. Myelóm myší/myší nádorový lymfocyt/ a lymfocyt musia byť geneticky blízke, aby bola fúzia úspešná.

Príprava monoklonálnych protilátok predstavuje ucelený technologický postup pozostávajúci z celého radu nadväzujúcich krokov:-imunizácia
-odobratie sleziny a príprava na fúziu
-aktivácia myelómových buniek pre fúziu
-fúzia rodičovských buniek
-selekcia dcérskych hybridómov
-klonovanie a kultivácia hybridómov
-testovanie hybridómov na produkciu špecif. protilátok
-produkcia monoklonálnych protilátok

K najúspešnejším imunizačným schémam patrí imunizácia tromi dávkami podávanými subkutálne v 3 týždňových intervaloch, a slezina sa odoberá na 4. deň po poslednej injekcií. Pretože nie každá myš reaguje rovnako, je potrebné použiť na fúziu bunky z dvich slezín, alebo robiž paralelne 2-3 fúzie. Od odberu sleziny sa všetky ďalšie úkony vykonávajú v sterilom prostredí.
Postup: Slezina sa roztrhá pinzetou, a skalpelom a vyberie sa potrebné množstvo buniek pre fúziu s myelómovými bunkami. Asi týždeň pred fúziou sa pasážujú s cieľom dosiahnuť čo najvyšší počet rýchlo proliferujúcich buniek.

Pre ľahšie vyvolanie bunečných fúzií sa do zmiešanej suspenzie pridá polyetylénglykol.Jeho koncentrácia sa počas fúzie znižuje riedením z 5 na 2,5%. V 10 ml suspenzie by malo byť dosiahnuté 30-50x 106 slezinových buniek a 5-10x106 myelómových buniek.
Pre ďalší postup je dôležité oddeliť v suspenzií hybridómové bunky od nefúzovaných myelómových buniek.Lymfocyty po niekoľkých dňoch uhynú.Táto separácia sa uskutočňuje na HAT médiu